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產品名稱：腸道致病性大腸埃希氏菌EPEC核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
英文名稱：Multiplex PCR Detection Kit for Enteropathogenic E. coli (Fluorescent Probe Assays)
產品編號與包裝規格：
| 編號 | 規格 |
| FZ020BF2 | 48 測試/盒 |
產品簡介：本試劑盒僅用於食品樣本中腸道致病性大腸埃希氏菌 EPEC 的定性檢測。
檢測原理：基於 Real Time PCR 技術，根據《GB4789.6-2016》中 EPEC、STEC/EHEC 的判別依據，針對檢測所需的腸杆菌科的 16S rRNA 基因和毒力基因 escV、bfpB、stx1 與 stx2設計的引物、熒光探針以及其他反應優化配置所需試劑，加入待檢樣品即可進行擴增反應。在發生擴增過程中，熒光探針與目的基因片段結合，可被 Taq 酶分解並產生熒光信號，此時熒光定量 PCR 儀可識別該熒光信號，同時根據其強弱變化繪製出相應的實時擴增曲線，進而判定腸道致病性大腸埃希氏菌EPEC的類型。
escV、stx1&stx2、bfpB、16S rRNA 基因分別對應熒光報告基團 FAM、VIC、Cy5、ROX。
腸道致病性大腸埃希氏菌EPEC核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)產品組分：
儲存條件與保質期：-20℃避光儲存，有效期為 12 個月，避免反複凍融。
靈敏度：單通道最低檢驗限達到 100 CFU/Test
所需其他材料和適用儀器：熒光定量 PCR 儀（具有能夠檢測 FAM、VIC、Cy5、ROX 標記的熒光通道）、高速離心機、移液器、移液槍頭及離心管等。
腸道致病性大腸埃希氏菌EPEC核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)使用指南：
1，樣品前處理
1) 參照 GB 《4789.6−2016》，使用 1μL 接種環刮取新鮮培養的待鑒定的可疑菌落到含 30 μL 裂解液的無菌離心管中，充分懸浮菌體，輕彈管壁消除氣泡，99℃加熱 10 min；
2) 12000 r/min 離心 15 min，上清即為粗提的 DNA，可轉移至 0.2 mL 無菌離心管中，在-20℃下可長期保存。也可以選擇商業化的細菌基因組提取試劑盒進行提取。
2, 加樣、反應
1) 按照需求取 n 個 PCR 反應管（n=1 管陰性對照+待檢測樣品數+1 管陽性對照），從試劑盒中取出預混液，充分融化，渦旋後短暫離心，以上每管加入 20 μL 預混液，待用。
2) 向上述 n 個反應管中分別加入陰性對照、待測樣品 DNA、陽性對照各 5 μL，總反應體積為 25 μL。蓋緊管蓋，短暫離心，立即進行 PCR 擴增反應。
3) PCR 反應體係為 25 μL，取 FAM、VIC、Cy5、ROX 檢測通道，在反應階段 2 中60℃時收集熒光信號，具體程序如下：
| 反應階段 | 溫度 | 時間 | 信號收集 | 循環數 |
| 1 | 95°C | 30 sec | 1 | |
| 2 | 95°C | 5 sec | } 40 | |
| 60°C | 40 sec | ✔ |
3, 結果：一般情況下，可通過軟件自動設定的基線、閾值等直接讀取檢測結果。如需調整，可根據所使用儀器的自身情況（如噪聲等）以及選取的不同熒光通道進行調整。
1) 質量控製：陰性對照未出現明顯的 S 型擴增曲線或Ct 值＞37，陽性對照出現 S 型擴增曲線且其 Ct 值＜30。若陰陽性對照不同時滿足上述條件，則本次檢測結果無效，應重新檢測或與產品技術支持聯係。
2) 結果判讀：（根據反應所得 Ct 值判讀，具體見下表：）
| Ct值 | 判讀結果 |
| ≤35 | 對應的基因陽性。 |
| 35~37 | 建議重新檢測，若複測結果 Ct≥37，則對應的基因陰性，反之為陽性。 |
| ≥37 | 對應的基因陰性。 |
❖ stx1 和 stx2 基因共用一個通道，可能出現弱陽性現象。
❖ 陰性對照反應 16S rRNA 基因可能會出現弱陽性現象。
❖ 多重 qPCR 檢測可能出現不同熒光通道之間競爭抑製的問題，單基因分析時適當調整閾值線。
