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中藥材中黃曲黴毒素如何檢測
發布時間：2014-07-07 瀏覽次數：4581 分享：
黃曲黴毒素介紹
黃曲黴毒素是一類真菌(如黃曲黴和寄生曲黴)的有毒的代謝產物，它們具有很強的致癌性，主要存在於藥材、穀物、堅果、棉籽以及動物飼料相關的產品中。其毒性遠遠高於氰化物、砷化物和有機農藥的毒性，其中以B1毒性最大。當人攝入量大時，可發生急性中毒，出現急性肝炎、出血性壞死、肝細胞脂肪變性和膽管增生。當微量持續攝入，可造成慢性中毒，生長障礙，引起纖維性病變，致使纖維組織增生。
背景
各級食品藥品監管部門不斷加大中藥生產流通監管力度，努力保持中藥質量總體穩定。
國家食品藥品監督管理局關於規範中藥生產經營秩序嚴厲查處違法違規行為的通知(國食藥監安[2012]187號中，要求加強對重金屬及有害元素、農藥殘留、黃曲黴毒素等安全性指標的檢測和控製，切實保證中藥材質量和安全，另要求企業具備與生產品種相適應的檢驗設備和能力，嚴把質量檢驗關。《國家藥品安全“十二五”規劃》，規劃中明確提出“開展藥品快速檢驗技術研究，搭建檢驗技術共享平台”、“加快推進藥品快速檢驗技術在基層的應用，配置快速檢驗設備”、“加強縣級機構快速檢驗能力建設”的要求。
中藥中黃曲黴毒素的檢測方法
2010版《藥典》附錄IX V 黃曲黴毒素測定采用高效液相色譜法，另外增補藥典描述該法檢測建立增加柱後光化學衍生法。
原理
樣品經甲醇-水提取，提取液經過濾、稀釋，濾液經過含有黃曲黴毒素特異抗體的免疫親和柱層析淨化，黃曲黴毒素交聯在層析介質中的抗體上，此抗體對黃曲黴毒素B1、B2、G1、G2具有專一性，用水將免疫親和柱上雜質除去，以甲醇通過免疫親和柱洗脫，再經光化學衍生器柱後衍生，以提高檢測準確性。
主要試劑及耗材
氣控操作架：含氣泵
黃曲黴毒素免疫親和柱1ml或3ml
光化學衍生器
玻璃微纖維濾紙 ：直徑11cm、孔徑1.5µm
玻璃試管：直徑12mm，長75mm，無熒光特性
注射器：10ml、20ml
檢測步驟
樣品粉碎——提取——洗脫液進樣、親和柱淨化——化學衍生——檢測數值
氣控操作架的使用說明：
在樣品粉碎後需要過親和柱淨化，也就是怎麼方便親和柱使用操作的問題，氣控操作架能有效地提高這個環節的工作效率：
1.連接組裝好的氣控操作架，將免疫親和柱、注射器針筒與氣控操作架連接;
2.將處理後的溶液上樣;
3.調節空氣泵旋鈕以控製流速，使樣液以1-2d/s的速度流出;
4.待樣液完全排幹，用去離子水或蒸餾水以2-3d/s的流速洗滌兩次，每次10ml;
5.待液體完全排幹，將樣品瓶置於親和柱下方，上樣1ml甲醇以1d/s的速度流出至完全排幹。
以上操作步驟是用免疫親和柱--高效液相法檢測中藥中黃曲黴毒素的必經步驟，如使用氣控操作架就能很好的固定親和柱並以可控流速操作，既高效也能使操作誤差減到最小。
使用光化學衍生器原因
由於黃曲黴具有較強的紫外吸收和產生熒光的特性，因此可以進行HPLC-紫外或熒光檢測，但是同時黃曲黴毒素中的B1、G1由於其在含水的流動相中容易產生熒光淬滅，因此在很多的實驗中都會采用衍生法測定黃曲黴毒素。
衍生的方法也很多：有柱前的，柱後的，在線的，由於在線的柱後光化學衍生有明顯的優勢，所以現在被增補為藥典的微生物檢測方法，優勢主要在於(無需任何化學試劑、對人員無傷害;無需人員直接操作、避免誤差; 無需擔心衍生液腐蝕檢測器)
